புதிய கொரோனா வைரஸ்(SARS-Cov-2) நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட்
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluதாதுscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Pரோடுக்t name 】புதிய கொரோனா வைரஸ்(SARS-Cov-2) நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கருவி (ஃப்ளோரசன்ட் RT-PCR ஆய்வு முறை)
【Packaging specifications 】25 டெஸ்ட்/கிட்
【Intended usவயது】
கோவிட்19 என சந்தேகிக்கப்படும் நபர்களிடமிருந்து நாசோபார்னீஜியல் ஸ்வாப்கள், ஓரோபார்னீஜியல் (தொண்டை) ஸ்வாப்கள், முன்புற நாசி ஸ்வாப்ஸ், நாசி வாஷ்ஸ் மற்றும் நாசி ஆஸ்பிரேட்டுகள் ஆகியவற்றில் புதிய கொரோனா வைரஸிலிருந்து நியூக்ளிக் அமிலத்தை தரமான முறையில் கண்டறிவதற்காக இந்த கிட் பயன்படுத்தப்படுகிறது. புதிய கொரோனா வைரஸின் ORF1ab மற்றும் N மரபணுக்களைக் கண்டறிதல், புதிய கொரோனா வைரஸ் தொற்றுக்கான துணை நோயறிதல் மற்றும் தொற்றுநோயியல் கண்காணிப்புக்குப் பயன்படுத்தப்படலாம்.
【Principles of the pரோஸ்dure 】
இந்த கிட் குறிப்பிட்ட TaqMan ஆய்வுகள் மற்றும் நாவல் கொரோனா வைரஸ் (SARS-Cov-2) ORF1ab மற்றும் N மரபணு வரிசைகளுக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்களுக்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது. PCR எதிர்வினை தீர்வு 3 செட் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகளின் கூடுதல் தொகுப்பு எண்டோஜெனஸ் ஹவுஸ் கீப்பிங் மரபணுக்களைக் கண்டறியும் கருவியின் உள் நிலையான கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
சோதனைக் கொள்கை என்னவென்றால், பிசிஆர் எதிர்வினையில் டாக் என்சைமின் எக்ஸானூக்லீஸ் செயல்பாட்டால் குறிப்பிட்ட ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு செரிக்கப்படுகிறது மற்றும் சிதைகிறது, இதனால் நிருபர் ஃப்ளோரசன்ட் குழுவும் அணைக்கப்பட்ட ஃப்ளோரசன்ட் குழுவும் பிரிக்கப்படுகின்றன, இதனால் ஃப்ளோரசன்ஸ் கண்காணிப்பு அமைப்பு ஒரு ஒளிரும் தன்மையைப் பெறுகிறது. சமிக்ஞை, பின்னர் PCR பெருக்கத்தின் செறிவூட்டல் விளைவு மூலம், ஆய்வின் ஒளிரும் சமிக்ஞையானது ஒரு செட் த்ரெஷோல்ட் மதிப்பை-Ct மதிப்பை (சுழற்சி வாசல்) அடைகிறது. இலக்கு ஆம்ப்ளிகான் இல்லாத நிலையில், ஆய்வின் நிருபர் குழு தணிக்கும் குழுவிற்கு அருகில் உள்ளது. இந்த நேரத்தில், ஃப்ளோரசன்ஸ் அதிர்வு ஆற்றல் பரிமாற்றம் ஏற்படுகிறது, மேலும் நிருபர் குழுவின் ஃப்ளோரசன்ஸ் தணிக்கும் குழுவால் அணைக்கப்படுகிறது, இதனால் ஃப்ளோரசன்ட் பிசிஆர் கருவி மூலம் ஒளிரும் சமிக்ஞையை கண்டறிய முடியாது.
சோதனையின் போது ரியாஜெண்டுகளின் பயன்பாட்டைக் கண்காணிக்கும் பொருட்டு, கிட் நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகளுடன் பொருத்தப்பட்டுள்ளது: நேர்மறை கட்டுப்பாடு இலக்கு தள மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட்டைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு டிஸ்டில்டு வாட்டர் ஆகும், இது சுற்றுச்சூழல் மாசுபாட்டைக் கண்காணிக்கப் பயன்படுகிறது. சோதனை செய்யும் போது ஒரே நேரத்தில் நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டை அமைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
【Main comபோனன்ts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | கூட்டுஎன்ட்ஸ் | |
Name | விவரக்குறிப்புஉருவாக்கம் | அளவுஇது | அளவுஇது | |
நேர்மறை கட்டுப்பாடு | 180 μL/குப்பியை | 1 | 1 | செயற்கையாக கட்டப்பட்ட பிளாஸ்மிடுகள், காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் |
எதிர்மறை கட்டுப்பாடு | 180 μL/குப்பியை | 1 | 1 | காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் |
SARS-Cov-2 கலவை | 358.5 μL/குப்பி | 1 | / | குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் ஜோடிகள், குறிப்பிட்ட கண்டறிதல் ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள், dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, டிஸ்டில்டு வாட்டர் போன்றவை |
என்சைம் கலவை | 16.5 μL/குப்பி | 1 | / | டாக் என்சைம்கள், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், யுஎன்ஜி என்சைம்கள் போன்றவை. |
SARS-Cov-2 கலவை (லியோபிலிஸ்டு) | 25 சோதனைகள்/குப்பிகள் | / | 1 | குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் ஜோடிகள், குறிப்பிட்ட கண்டறிதல் ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள், டிஎன்டிபிகள், டாக் என்சைம்கள், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், டிஸ்டில்டு வாட்டர் போன்றவை. |
2x தாங்கல் | 375 μL/குப்பியை | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் போன்றவை. |
குறிப்பு:(1) வெவ்வேறு தொகுதி கருவிகளில் உள்ள கூறுகளை கலக்கவோ அல்லது ஒன்றுக்கொன்று மாற்றவோ முடியாது.
(2) உங்களின் சொந்த வினைப்பொருளைத் தயாரிக்கவும்: நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவி.
【Storage condஇதிons மற்றும் expiration date 】
For BST-SARS-25:நீண்ட நேரம் -20±5℃ இல் போக்குவரத்து மற்றும் சேமிக்கவும்.
For BST-SARS-DR-25:அறை வெப்பநிலையில் போக்குவரத்து. நீண்ட நேரம் -20±5℃ இல் சேமிக்கவும்.
மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும். செல்லுபடியாகும் காலம் தற்காலிகமாக 12 மாதங்களுக்கு அமைக்கப்பட்டுள்ளது.
உற்பத்தி மற்றும் பயன்பாட்டின் தேதிக்கான லேபிளைப் பார்க்கவும்.
முதல் திறந்த பிறகு, வினைப்பொருளை -20±5 ° C இல் 1 மாதத்திற்கு மிகாமல் அல்லது ரீஜெண்ட் காலம் முடியும் வரை, எந்தத் தேதி முதலில் வந்தாலும், மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரைப்பு சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும், வினைப்பொருள் உறைதல் எண்ணிக்கையைத் தவிர்க்கவும். - thaw சுழற்சிகள் 6 முறைக்கு மேல் இருக்கக்கூடாது.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.பொருந்தக்கூடிய மாதிரி வகை: பிரித்தெடுக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலக் கரைசல்.
2.மாதிரி சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து: 20±5℃ல் 6 மாதங்களுக்கு சேமிக்கவும். மாதிரிகளை 6 முறைக்கு மேல் உறைய வைத்து கரைக்கவும்.
【Tமதிப்பீடுing method】
1.Nucleic acid extraction
வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலத்தைப் பிரித்தெடுக்க பொருத்தமான நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவியைத் தேர்ந்தெடுத்து, அதற்குரிய கிட் வழிமுறைகளைப் பின்பற்றவும். Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. அல்லது அதற்கு சமமான நியூக்ளிக் அமில சுத்திகரிப்பு கிட் மூலம் தயாரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு கருவியைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
2. Reaction ரீஜ்nt prepஅராtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 கலவை மற்றும் என்சைம் கலவையை அகற்றவும், அறை வெப்பநிலையில் முற்றிலும் உருகவும், வோர்டெக்ஸ் சாதனம் மூலம் நன்கு கலக்கவும், பின்னர் சுருக்கமாக மையவிலக்கு செய்யவும்.
(2) 16.5uL என்சைம் கலவை 358.5uL SARS-Cov-2 கலவையில் சேர்க்கப்பட்டு, கலப்பு எதிர்வினைத் தீர்வைப் பெற நன்கு கலக்கப்பட்டது.
(3) சுத்தமான 0.2 மில்லி PCR ஆக்டல் குழாயைத் தயாரித்து, ஒரு கிணற்றுக்கு 15uL கலப்பு எதிர்வினை கரைசலைக் கொண்டு அதைக் குறிக்கவும்.
(4) 15 μL சுத்திகரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலக் கரைசல், நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு ஆகியவற்றைச் சேர்த்து, ஆக்டல் டியூப் தொப்பியை கவனமாக மூடவும்.
(5) தலைகீழாக கவிழ்ப்பதன் மூலம் நன்கு கலக்கவும், குழாயின் அடிப்பகுதியில் திரவத்தை குவிக்க விரைவாக மையவிலக்கு செய்யவும்.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) எதிர்வினை கலவையை தயார் செய்ய SARS-Cov-2 கலவையில் 375ul 2x பஃபரைச் சேர்க்கவும் ((லியோபிலிஸ்டு) குழாய் மூலம் நன்கு கலக்கவும், பின்னர் சுருக்கமாக மையவிலக்கு செய்யவும். நீண்ட கால சேமிப்பு.)
(2) சுத்தமான 0.2 மிலி PCR ஆக்டல் குழாயைத் தயாரித்து, ஒரு கிணற்றுக்கு 15μL எதிர்வினை கலவையைக் குறிக்கவும்.
(3) 15μL சுத்திகரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலக் கரைசல், நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் எதிர்மறைக் கட்டுப்பாடு ஆகியவற்றைச் சேர்த்து, ஆக்டல் டியூப் தொப்பியை கவனமாக மூடவும்.
(4) தலைகீழாக கவிழ்ப்பதன் மூலம் நன்கு கலக்கவும், குழாயின் அடிப்பகுதியில் திரவத்தை குவிக்க விரைவாக மையவிலக்கு செய்யவும்.
3. பிசிஆர் amplification (இயக்க அமைப்புகளுக்கு கருவி கையேட்டைப் பார்க்கவும்.)
3. 1 பிசிஆர் 8-குழாயை ஃப்ளோரசன்ட் பிசிஆர் கருவியின் மாதிரி அறைக்குள் வைத்து, சோதனைக்கு ஏற்ற மாதிரியை, நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டை ஏற்றும் வரிசைக்கு ஏற்ப அமைக்கவும்.
3.2 ஃப்ளோரசன்ஸ் கண்டறிதல் சேனல்:
(1) ORF1ab மரபணு FAM இன் கண்டறிதல் சேனலைத் தேர்ந்தெடுக்கிறது (நிருபர்: FAM, Quencher: எதுவுமில்லை).
(2) N மரபணு VICயின் கண்டறிதல் சேனலைத் தேர்ந்தெடுக்கிறது (நிரூபிப்பவர்: VIC, Quencher: எதுவுமில்லை).
(3) உள்ளக நிலையான மரபணு CY5 இன் கண்டறிதல் சேனலைத் தேர்ந்தெடுக்கிறது (செய்தியாளர்: CY5, Quencher: எதுவுமில்லை).
(4) செயலற்ற குறிப்பு ROX ஆக அமைக்கப்பட்டுள்ளது.
3.3 PCR நிரல் அளவுரு அமைப்பு:
படி | வெப்பநிலை (℃) | நேரம் | சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை | |
1 | தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் எதிர்வினை | 50 | 15 நிமிடம் | 1 |
2 | Taq என்சைம் செயல்படுத்தல் | 95 | 2.5 நிமிடம் | 1 |
3 | Taq என்சைம் செயல்படுத்தல் | 93 | 10 வி | 43 |
அனீலிங் நீட்டிப்பு மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் கையகப்படுத்தல் | 55 | 30 வி |
அமைத்த பிறகு, கோப்பைச் சேமித்து, எதிர்வினை நிரலை இயக்கவும்.
4.Results analysis
நிரல் முடிந்ததும், முடிவுகள் தானாகவே சேமிக்கப்படும், மேலும் பெருக்க வளைவு பகுப்பாய்வு செய்யப்படுகிறது. பெருக்க வளைவு கருவி இயல்புநிலை வரம்பிற்கு அமைக்கப்பட்டுள்ளது.
【Explanation of test results 】
1. பரிசோதனையின் செல்லுபடியை தீர்மானிக்கவும்: நேர்மறை கட்டுப்பாடு FAM, VIC சேனல் ஒரு பொதுவான பெருக்க வளைவைக் கொண்டிருக்க வேண்டும், மேலும் Ct மதிப்பு பொதுவாக 34 க்கும் குறைவாக இருக்கும், ஆனால் வெவ்வேறு கருவிகளின் வெவ்வேறு த்ரெஷோல்ட் அமைப்புகளால் ஏற்ற இறக்கமாக இருக்கலாம். எதிர்மறை கட்டுப்பாடு FAM, VIC சேனல் பெருக்கப்படாத Ct ஆக இருக்க வேண்டும். மேலே உள்ள தேவைகள் ஒரே நேரத்தில் பூர்த்தி செய்யப்பட வேண்டும் என்று ஒப்புக் கொள்ளப்படுகிறது, இல்லையெனில் இந்த சோதனை தவறானது.
2. முடிவு தீர்ப்பு
FAM/VIC சேனல் | தீர்ப்பு முடிவு |
சிடி 37 | மாதிரி சோதனை நேர்மறையானது |
37≤Ct 40 | பெருக்க வளைவு S- வடிவமானது, மேலும் சந்தேகத்திற்குரிய மாதிரிகள் மீண்டும் ஆய்வு செய்யப்பட வேண்டும்; மறுபரிசீலனை முடிவுகள் சீரானதாக இருந்தால், அது நேர்மறையாக மதிப்பிடப்படுகிறது, இல்லையெனில் அது எதிர்மறையாக இருக்கும் |
Ct≥40 அல்லது பெருக்கம் இல்லை | மாதிரி சோதனை எதிர்மறையானது (அல்லது கிட் கண்டறிதலின் குறைந்த வரம்புக்குக் கீழே) |
குறிப்பு: ( 1) FAM சேனல் மற்றும் VIC சேனல் இரண்டும் ஒரே நேரத்தில் நேர்மறையாக இருந்தால், SARS-Cov-2 நேர்மறையாக இருக்கும்.
(2) FAM சேனல் அல்லது VIC சேனல் நேர்மறையாகவும் மற்ற சேனல் எதிர்மறையாகவும் இருந்தால், சோதனை மீண்டும் செய்யப்பட வேண்டும். அதே நேரத்தில் நேர்மறையாக இருந்தால், அது SARS-Cov-2 நேர்மறையாக மதிப்பிடப்படும், இல்லையெனில் அது SARS-Cov-2 எதிர்மறையாக மதிப்பிடப்படும்.